Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型癌症患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次出有现去甲自身免疫到出有现1M-心血管疾病诊疗腹泻的成果亲率在儿童时期就有不错的描绘，多个去甲自身免疫感染性的儿童中的有70%在胰岛素变换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的儿童这一百分比提高到84%。来得之下，%诊疗1M-心血管疾病一半以上的M-1M-心血管疾病的患病机制还不会获取充分的研究课题。

越来越多的人开始用作分期系统来假定1M-心血管疾病的成果：个纤在出有现多种去甲自身免疫时转回第1阶段性，出有现摄入量异常时转回第2阶段性，出有现腹泻时转回第3阶段性。一些多发去甲自身免疫感染性的个纤，在1期和2期，成果较比较慢，并发展为患病的1M-心血管疾病。我们早先描绘了一组成员在首次样品到多种去甲自身免疫比对后据估计10年无心血管疾病的以致于比较慢成果者，这组成员病症次数少，但相似性并不完全一致。随后，我们发现去甲自身淋巴细胞依赖性CD8+T巨噬细胞催化在成果平稳的病症中的前提不共存，但在未来会患病和一直共存的心血管疾病病症中的很更容易样品到。这可能声称，与成果病症来得，这些病症自身免疫细胞的调节进一步提高。

中期研究课题声称，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但心血管疾病病症共存一些前提功能缺陷，其中的包含对IL-2的催化意志力增高。此外，心血管疾病病症中的的波动CD4+T巨噬细胞可能对调节来得具抵抗性，展示出为波动T巨噬细胞的消除减弱，自然转化成的Treg和纤外转化成的可借Treg，以及淋巴细胞个人经历的CD4+T巨噬细胞中的IL-2催化减弱。本研究课题的最终目标是描绘了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在一小群以致于平稳成果者中的的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以人群为基础的纵向研究课题，在21岁都有住院的病症直系亲属中的检查1M-心血管疾病的致命因素。我们早先描绘了一直平稳成果者的相似性，他们持续保持多重去甲自身免疫感染性超过10年，但不会出有现心血管疾病的诊疗腹泻，比较慢性或非进行时性自身免疫。随后，10名继续持续保持无心血管疾病并希望提供大量血液循环比对的平稳成果者确立T和B巨噬细胞前提功能分析方法。在在此之前的研究课题中的，8名比较慢成果者(SP组成员)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲自身免疫感染性。所有的举例来说都所处1M-心血管疾病成果的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身免疫对某些淋巴细胞的感染性催化，然而，一名病症早就所处2期据估计6年，但不会出有现诊疗腹泻，一名病症被诊断为心血管疾病，该受试者72岁，在通过捕捉到实验比对时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据分析方法中的对该小分子进行时了分开风险评估。分离外周血单个核能巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞精和T巨噬细胞消除试验风险评估小分子中的Treg的阈值、表M-和前提功能。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重生)进行时无行政官员聚类分析方法，风险评估Treg表M-。

结果：与生活品质小分子来得，来自比较慢成果纤的思绪CD4+T巨噬细胞的行政官员聚类推测，激已逝的思绪CD4+ Treg阈值提高，与糖皮质激素可借的TNFR相关蛋白(GITR)理解提高有关。一名HbA1c急剧下降的病症与成果平稳者和匹配的对照组成员来得，Treg谱有所不尽相同。前提功能分析方法声称，与生活品质小分子来得，来自平稳成果纤的Treg内皮巨噬细胞的CD4+波动T巨噬细胞消除明显受损。展示出为对波动CD4+T巨噬细胞CD25和CD134理解的消除提高。

三幅1 透彻的表M-分析方法推测，CD4+Treg亚M-在比较慢成果队列中的提高。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有小分子的已逝CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据上面物理解鉴定出有10个元簇:思绪T巨噬细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)用作9个不尽相同Treg上面作用于的10个元簇的MST。每个结点代表一个一个大(100个一个大)，来得大的元一个大(10个元一个大)在结点组成员周围上色。每个结点中的的面包三幅坚称单个上面的理解级别。(b)每个元聚类的热三幅，以推测整纤上面理解。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)作用于三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的表层。(e-l)相比之下稀土元素为每个metacluster箱内支线三幅(稀土元素> 0.05%)断定为HD和SP组成员:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T巨噬细胞(l)。粉红色橘色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用作CITRUS的预测模M-声称，Treg阈值的提高是成果平稳的标志。级别依赖M-(a - f)和柑桔分析方法(g-k)比较SP举例来说和匹配的HD举例来说在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的指标性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR理解进行时分离，虚拟FlowSOM群纤。(b) HD(小点)和SP(蓝点)组成员以及小分子SP 606(粉红色)中的CD25+ cd127的阈值摘要三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖M-子集的箱内支线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解其中心渐变，箭头突出有的簇被识别为SP和HD队列之间的不尽相同。(j)箱内支线三幅推测了在SP(蓝点)和HD(灰点)组成员中的，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相比之下稀土元素(百分比)。(k)直方三幅推测每个簇的表M-(粉红色)和Treg上面相比之下理解与背景理解(蓝色);上列，文件系统Treg_3;下面即刻，文件系统Treg_4。背景与所有其他簇中的上面的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测

三幅3 与生活品质献血者来得，成果平稳者思绪treg的GITR提高。每个思绪CD4+T巨噬细胞元簇(思绪T巨噬细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个理解上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的理解热三幅(sp606不包含在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR理解联接，推测直方三幅(c)和摘要三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和检测，p< 0.07(粉红色)所有小分子包含，p< 0.05(蓝色)小分子SP 606和匹配的HD不包含在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR理解，从级别依赖M-，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(粉红色)联接，推测直方三幅(e)和摘要三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检测

三幅4 来自平稳成果的CD4+ treg巨噬细胞支配波动CD4+T巨噬细胞的意志力增高。SP组成员用蓝色的支线和橘色坚称，HD组成员用黄色的支线和橘色坚称，粉红色的支线/橘色坚称小分子sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞进行时分选。CD4+CD25−(转发者)被上面为CFSE, Treg按捕捉到的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠激已逝巨噬细胞，培育3天后进行时流式巨噬细胞精样品。(a-d)与CD4+转发者相比之下应的treg培育(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培育。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE消除百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除百分比。用作感染性对照(激已逝的作出反应巨噬细胞不含treg)计算消除百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 波动CD4+T巨噬细胞对平稳成果的T巨噬细胞激已逝的消除来得敏感。SP组成员用蓝色的支线和橘色坚称，HD组成员用黄色的支线和橘色坚称，粉红色的支线/橘色坚称小分子sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞进行时分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel上面，treg按捕捉到的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠激已逝巨噬细胞，培育3天后进行时流式巨噬细胞精(CD25反染)和巨噬细胞因子分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培育。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE消除前年(b)。(c,d) CD25消除前年(c)和CD134消除前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育中的的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们计算出来有的事实是，来自平稳成果子的激已逝思绪CD4+Treg在GITR理解中的获取了扩张和珍贵，突显了进一步研究课题Treg在1M-心血管疾病风险个纤中的的值得注意的有效性。

注解出有处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28