Diabetologia：激活但功能受损的失忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到胰脏自身血清到用到1HG高血压病理呕吐的困难重重率在儿童中期就有良好的描绘，多个胰脏自身血清感染性的儿童里有70%在血清转换后10年内患上高血压，而随访15年的儿童这一数目提高到84%。相比之下之下，占病理1HG高血压一半以上的HG1HG高血压的发病机制还没有人得不到充分的研究者。

越来越多的人开始运用于分期中系统来定义1HG高血压的困难重重：性状在用到多种胰脏自身血清时转至第1期中，用到体温精神状态时转至第2期中，用到呕吐时转至第3期中。一些多发胰脏自身血清感染性的性状，在1期和2期，困难重重更加快，并发展为发病的1HG高血压。我们此前描绘了一四组在首次体检到多种胰脏自身血清样本后至不算10年无高血压的极慢困难重重者，这四组病患者人数不算，但相似性颇为确实。随后，我们发现胰脏自身抗体特异性CD8+T细胞核化学反应当在困难重重减慢的病患者里基本不普遍存在，但在全面性发病和则有的高血压病患者里很易于体检到。这或许说明，与困难重重病患者相比之下，这些病患者自身免疫化学反应当的调节增强。

最初研究者说明，尽管调节性T细胞核(Treg)生产量经常性，但高血压病患者普遍存在一些特性原因，其里之外对IL-2的化学反应当能力也减缓。此外，高血压病患者里的畸变CD4+T细胞核或许对调节更加具抵抗性，展示出为畸变T细胞核的抑止移向，连续性造成的Treg和体外造成的可借Treg，以及抗体经历的CD4+T细胞核里IL-2化学反应当移向。本研究者的目的是描绘了CD4+调节性T细胞核(Treg)在一小群极减慢困难重重者里的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以年轻人辅以的两端研究者，在21岁以下确诊的病患者亲友里体检1HG高血压的小心各种因素。我们此前描绘了长年减慢困难重重者的相似性，他们保证多重胰脏自身血清感染性超过10年，但没有人用到高血压的病理呕吐，慢性或非开展性自身免疫。随后，10名继续保证无高血压并乐意提供大量血液样本的减慢困难重重者纳入T和B细胞核特性归纳。在目前的研究者里，8名慢困难重重者(SP四组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身血清感染性。所有的发起者都位处1HG高血压困难重重的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身血清对某些抗体的施打，然而，一名病患者已经位处2期至不算6年，但没有人用到病理呕吐，一名病患者被诊断为高血压，该受试者72岁，在挖掘出实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳里对该NADPH开展了单独审核。分离外周血单个核细胞核(PBMCs)，运用于多参数流式细胞核术和T细胞核抑止试验性审核NADPH里Treg的阈值、表HG和特性。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和转回)开展无监督聚类归纳，审核Treg表HG。

结果：与心理健康NADPH相比之下，来自慢困难重重体的梦境CD4+T细胞核的监督聚类说明，激活的梦境CD4+ Treg阈值提高，与糖皮质激素可借的TNFR相关抗体(GITR)强调提高有关。一名HbA1c升高的病患者与困难重重减慢者和匹配的相异四组相比之下，Treg谱有所不同。特性归纳说明，与心理健康NADPH相比之下，来自减慢困难重重体的Treg介导的CD4+畸变T细胞核抑止明显受损。展示出为对畸变CD4+T细胞核CD25和CD134强调的抑止提高。

上图1 深入的表HG归纳说明，CD4+Treg亚HG在慢困难重重缓冲区里提高。由FlowSOM分解成的Treg室，聚集在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据记号物强调鉴定出10个元簇:梦境T细胞核_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞核;HLA-DR + GITR +梦境T细胞核;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)运用于9个不同Treg记号分解成的10个元簇的MST。每个节点代表一个空降兵(100个空降兵)，更加大的元空降兵(10个元空降兵)在节点四组周围上色。每个节点里的面包上图暗示单个记号的强调最高级别。(b)每个元聚类的热上图，以说明整体记号强调。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)分解成上图，以及FlowSOM辨别的每个元簇的表层。(e-l)相比较丰度为每个metacluster盒终点站上图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP四组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞核(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞核(l)。红色带子代表这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 运用于CITRUS的预测模HG声称，Treg阈值的提高是困难重重减慢的logo。PG门控(a - f)和柑橘归纳(g-k)比较SP发起者和匹配的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的代表性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR强调开展分离，模拟FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(星点)四组以及NADPHSP 606(红色)里CD25+ cd127的阈值汇总上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的盒终点站上图;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇球状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度可视，标记引人注目的簇被辨别为SP和HD缓冲区之间的不同。(j)盒终点站上图说明了在SP(星点)和HD(灰点)四组里，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相比较丰度(数目)。(k)直方上图说明每个簇的表HG(紫色)和Treg记号相比较强调与背景强调(紫色);上列，CPUTreg_3;下面几当晚，CPUTreg_4。背景与所有其他簇里记号的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检验

上图3 与心理健康献血者相比之下，困难重重减慢者梦境treg的GITR提高。每个梦境CD4+T细胞核元簇(梦境T细胞核_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞核;HLA-DR + GITR +梦境T细胞核;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)体检每个强调记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的强调热上图(sp606不之外在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR强调串联，说明直方上图(c)和汇总上图(d)。Wilcoxon配对下标秩和检验，p< 0.07(红色)所有NADPH之外，p< 0.05(紫色)NADPHSP 606和匹配的HD不之外在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR强调，从PG门控，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(红色)串联，说明直方上图(e)和汇总上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对下标秩检验

上图4 来自减慢困难重重的CD4+ treg细胞核控制畸变CD4+T细胞核的能力也减缓。SP四组用紫色的终点站和带子暗示，HD四组用黑色的终点站和带子暗示，红色的终点站/带子暗示NADPHsp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核开展分选。CD4+CD25−(此番者)被记号为CFSE, Treg按观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠诱导细胞核，培养3当晚开展流式细胞核术体检。(a-d)与CD4+此番者相比较应当的treg培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百分比。运用于感染性相异(激活的响应当细胞核分别为treg)计算抑止百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 畸变CD4+T细胞核对减慢困难重重的T细胞核诱导的抑止更加敏感。SP四组用紫色的终点站和带子暗示，HD四组用黑色的终点站和带子暗示，红色的终点站/带子暗示NADPHsp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核开展分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel记号，treg按观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠诱导细胞核，培养3当晚开展流式细胞核术(CD25反染)和细胞核因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同完成培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止百分率(b)。(c,d) CD25抑止百分率(c)和CD134抑止百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养里的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自减慢困难重重子的诱导梦境CD4+Treg在GITR强调里得不到了扩展和丰富，强调了进一步研究者Treg在1HG高血压高风险性状里的异质性的必要性。

书名出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28