Diabetologia：激活但功能受到破坏的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现肾脏自身突变到显现1型式肝炎外科征状的令人满意不下在儿童中后期就有很好的详细描述，多个肾脏自身突变乙型式肝炎的儿童中都有70%在血清转换后10天内患上肝炎，而随访15年的儿童这一比重增高到84%。相较之下，九成外科1型式肝炎一半以上的型式1型式肝炎的患病机制还没有给与前提的研究课题。

越来越多的人开始应以用于分期系统设计来界定1型式肝炎的令人满意：生殖在显现多种肾脏自身突变时进到第1先决条件，显现血压极其时进到第2先决条件，显现征状时进到第3先决条件。一些多发肾脏自身突变乙型式肝炎的生殖，在1期和2期，令人满意极快，并持续发展为患病的1型式肝炎。我们先前详细描述了一第三组在首次检测到多种肾脏自身突变抽样后至寡10年无肝炎的极比较慢令人满意者，这第三组病征多人寡，但不同之处非常确实。随后，我们发掘出肾脏自身淋巴细胞特异性CD8+T细胞膜质弟化以在令人满意较快的病征中都基本不依赖于，但在近期患病和或多或少的肝炎病征中都很更容易检测到。这显然表明，与令人满意病征相较，这些病征自身病原基底的缓冲增强。

早期研究课题表明，尽管缓冲性T细胞膜(Treg)量正常，但肝炎病征依赖于一些特性弱点，其中都之外对IL-2的质弟化以意志力降低。此外，肝炎病征中都的effect以CD4+T细胞膜显然对缓冲突显抵抗性，表现为effect以T细胞膜的抑制作用减弱，自然产生的Treg和基底外产生的可借Treg，以及淋巴细胞境况的CD4+T细胞膜中都IL-2质弟化以减弱。本研究课题的目的是详细描述了CD4+缓冲性T细胞膜(Treg)在一小群极较快令人满意者中都的不同之处，他们的年长为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以成年人为基础的纵向研究课题，在21岁此表确诊的病征亲属中都检查1型式肝炎的危险环境因素。我们先前详细描述了经常性较快令人满意者的不同之处，他们保有多重肾脏自身突变乙型式肝炎超过10年，但没有显现肝炎的外科征状，比较慢性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名在此之后保有无肝炎并愿意提供大量尿液抽样的较快令人满意者纳入T和B细胞膜特性量化。在现在的研究课题中都，8名比较慢令人满意者(SP第三组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的肾脏自身突变乙型式肝炎。所有的组织者都属于1型式肝炎令人满意的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身突变对某些淋巴细胞的乙型式肝炎质弟化以，然而，一名病征不太可能属于2期至寡6年，但没有显现外科征状，一名病征被诊断为肝炎，该受试者72岁，在热带植物实验抽样时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据量化中都对该ADP顺利完成了单独指标。剥离外周血单个核子细胞膜(PBMCs)，采用多冗余流式细胞膜绝技和T细胞膜抑制作用试验指标ADP中都Treg的频不下、特异性式和特性。应以用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利完成无监督聚类量化，指标Treg特异性式。

结果：与保健ADP相较，来自比较慢令人满意基底的无意识CD4+T细胞膜的监督聚类推断，抑制的无意识CD4+ Treg频不下增高，与阿托品可借的TNFR相关复合物(GITR)理解增高有关。一名HbA1c消退的病征与令人满意较快者和冗余的对照第三组相较，Treg谱有所各不相同。特性量化表明，与保健ADP相较，来自较快令人满意基底的Treg介导的CD4+effect以T细胞膜抑制作用微小受损。表现为对effect以CD4+T细胞膜CD25和CD134理解的抑制作用增高。

左图1 深入的特异性式量化推断，CD4+TregHIV-式在比较慢令人满意数据流中都增高。由FlowSOM转化成的Treg室，聚集在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据记号物理解鉴定出10个元簇:无意识T细胞膜_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +无意识T细胞膜;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)应以用于9个各不相同Treg记号转化成的10个元簇的MST。每个链表代表一个坦克部队(100个坦克部队)，更多的元坦克部队(10个元坦克部队)在链表第三组一处上色。每个链表中都的饼左图透露单个记号的理解级别。(b)每个元聚类的热左图，以推断全面性记号理解。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)转化成左图，以及FlowSOM识别的每个元簇的裂口。(e-l)相对来说重元素为每个metacluster箱两条路线左图(重元素> 0.05%)相符为HD和SP第三组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞膜(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞膜(l)。橘色橘色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推字母秩筛选。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 应以用于CITRUS的分析表明式证实，Treg频不下的增高是令人满意较快的红色。国际标准去极化(a - f)和柑橘量化(g-k)来得SP组织者和冗余的HD组织者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的代表性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR理解顺利完成剥离，虚拟FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(白斑)第三组以及ADPSP 606(橘色)中都CD25+ cd127的频不下简介左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去极化弟集的箱两条路线左图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)龙眼簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解数值制做，圆圈突出的簇被识别为SP和HD数据流错综复杂的各不相同。(j)箱两条路线左图推断了在SP(白斑)和HD(灰点)第三组中都，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对来说重元素(比重)。(k)直方左图推断每个簇的特异性式(粉红色)和Treg记号相对来说理解与氛围理解(白色);上列，闪存Treg_3;下面正要，闪存Treg_4。氛围与所有其他簇中都记号的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推字母秩筛选

左图3 与保健献血者相较，令人满意较快者无意识treg的GITR增高。每个无意识CD4+T细胞膜元簇(无意识T细胞膜_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +无意识T细胞膜;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个理解记号的推移。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的理解热左图(sp606不之外在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中都所有HD(棕色)、所有SP(白色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR理解串连，推断直方左图(c)和简介左图(d)。Wilcoxon以此类推字母秩和筛选，p< 0.07(橘色)所有ADP之外，p< 0.05(白色)ADPSP 606和冗余的HD不之外在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR理解，从国际标准去极化，从所有HD(棕色)、所有SP(白色)和SP 606(橘色)串连，推断直方左图(e)和简介左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推字母秩筛选

左图4 来自较快令人满意的CD4+ treg细胞膜控制effect以CD4+T细胞膜的意志力降低。SP第三组用白色的两条路线和橘色透露，HD第三组用黑色的两条路线和橘色透露，橘色的两条路线/橘色透露ADPsp606。应以用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利完成分选。CD4+CD25−(应以答者)被记号为CFSE, Treg按注意到的比重滴定。用抗CD3 /28微珠转化细胞膜，培植3过后顺利完成流式细胞膜绝技检测。(a-d)与CD4+应以答者相对来说应以的treg培植(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应以答者培植。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE抑制作用百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用百分比。应以用于乙型式肝炎对照(抑制的鼓动以细胞膜不含treg)计算抑制作用百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

左图5 effect以CD4+T细胞膜对较快令人满意的T细胞膜转化的抑制作用更寻常。SP第三组用白色的两条路线和橘色透露，HD第三组用黑色的两条路线和橘色透露，橘色的两条路线/橘色透露ADPsp606。应以用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利完成分选。CD4+CD25−(应以答者)被cfsel记号，treg按注意到的比重滴定。用抗CD3 /28微珠转化细胞膜，培植3过后顺利完成流式细胞膜绝技(CD25反染)和细胞膜因弟量化。HD Treg与HD、SP或sp606应以答者共同培植。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE抑制作用百分不下(b)。(c,d) CD25抑制作用百分不下(c)和CD134抑制作用百分不下(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中都的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

假设：我们得出的假设是，来自较快令人满意弟的转化无意识CD4+Treg在GITR理解中都给与了扩展和丰富，强调了再进一步研究课题Treg在1型式肝炎风险生殖中都的系统设计性的必要性。

原文注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28